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BOD（生化需氧量）测定仪通过监测微生物降解有机物的耗氧量评估水体污染程度，其检测精度依赖校准液的准确性。BOD校准液需模拟含可降解有机物的水体环境，且成分稳定、浓度可控，通常分为标准储备液（高浓度、长期保存）与工作校准液（低浓度、适配仪器量程），需遵循“无菌、避光、控温”原则配制，避免因成分变质或操作不当导致校准失效。 一、配制前的准备工作 1、物资与器具准备 试剂需选用基准级葡萄糖、谷氨酸（BOD校准液常用有机物，两者按比例混合可模拟天然有机物降解特性），且在有效期内，避免使用受潮、结块的试剂；器具需准备容量瓶（定容用）、移液管（精准移取）、烧杯（溶解混合）、玻璃棒（搅拌），所有器具需用蒸馏水浸泡清洁后晾干，若曾接触过杀菌剂（如次氯酸钠），需用无菌水反复冲洗，防止残留杀菌剂抑制微生物活性。 此外，需准备无菌密封试剂瓶（储存校准液，避免微生物污染）、标签纸（标注类型、配制日期、有效期），以及无菌水（用于稀释，不可用普通蒸馏水，需经灭菌处理，防止杂菌影响校准）。 2、环境与安全准备 配制需在洁净、室温（20℃左右，接近BOD检测标准温度）环境中进行，避免高温、强光直射（防止葡萄糖、谷氨酸分解）；若环境灰尘较多，需在超净工作台或无菌操作区进行，防止空气中杂菌落入校准液。个人需佩戴无菌手套、口罩，避免手部细菌或飞沫污染试剂，操作时禁止交谈，减少污染风险。 二、核心配制步骤 1、标准储备液的配制 标准储备液浓度较高，用于后续稀释成工作液，步骤如下： 试剂称量与溶解：按比例称取葡萄糖与谷氨酸（两者浓度比例需一致，确保降解特性稳定），放入无菌烧杯中，加入适量无菌水，用无菌玻璃棒轻轻搅拌至完全溶解（避免剧烈搅拌产生气泡，气泡易携带杂菌）；若溶解缓慢，可将烧杯置于20℃水浴中恒温搅拌，禁止加热（高温会破坏试剂结构）。 精准定容与灭菌：将溶解后的溶液沿玻璃棒缓慢注入无菌容量瓶，用无菌水多次冲洗烧杯与玻璃棒，冲洗液全部倒入容量瓶；加无菌水至刻度线，盖紧瓶塞颠倒摇匀，随后将溶液转移至无菌密封试剂瓶，进行灭菌处理（如高压蒸汽灭菌，需按试剂耐受温度设置，避免过度灭菌导致试剂分解）。 密封储存：灭菌后待溶液冷却至室温，贴上标签（标注“BOD标准储备液”“配制日期”“有效期”，储备液密封避光可保存1-2周），置于4℃冰箱冷藏，避免反复冻融导致浓度变化。 2、工作校准液的配制 工作校准液需根据bod测定仪量程配制（如仪器量程为0-200mg/L，工作液浓度可设为0mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L），步骤如下： 稀释储备液：用无菌移液管精准移取一定量标准储备液，注入无菌容量瓶中，避免移液管尖端触碰瓶壁（防止污染）；若储备液冷藏保存，需先放置至室温再稀释，避免温度差异导致体积误差。 无菌定容与混匀：向容量瓶中加无菌水至刻度线，盖塞后轻轻颠倒摇匀（BOD校准液需避免剧烈震荡，防止混入过多氧气影响后续微生物耗氧检测），确保浓度均匀。 即时使用：工作校准液需现配现用，配制后1小时内完成校准，避免放置时间过长导致微生物滋生（即使无菌操作，环境中仍可能有微量杂菌，长期放置会分解有机物，导致浓度下降）。 三、关键注意事项 1、防污染：保障校准液“无菌性” BOD校准液的核心是模拟纯净有机物环境，杂菌会直接分解有机物，导致浓度失真：配制全程需使用无菌器具与无菌水，避免手部、空气接触污染；若配制过程中溶液出现浑浊、异味，说明已污染，需立即丢弃重新配制。 2、防分解：把控试剂稳定性 葡萄糖、谷氨酸易受光照、高温分解，配制时需避光操作，储存时冷藏；稀释时禁止加热，若试剂溶解困难，仅可在20℃水浴中辅助溶解，防止温度过高破坏试剂。 3、空白校准液：不可忽视的“零浓度”基准 空白校准液（0mg/L）用于消除无菌水自身耗氧影响，配制方法为直接取无菌水装入校准瓶，无需添加任何试剂；需确保空白液与工作液灭菌、储存条件一致，避免因空白液污染或耗氧导致校准偏差。 四、总结 BOD测定仪校准液的配制核心是“无菌、稳定、精准”，需通过无菌操作避免杂菌污染，控制温度与光照防止试剂分解，按量程分阶段配制储备液与工作液。只有严格遵循配制规范，才能确保校准液浓度准确，为BOD测定仪提供可靠校准基准，保障水体生化需氧量检测数据的真实性。
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