水样中5天前的溶解氧浓度减去5天后的溶解盐浓度。取水样后，先测定水中溶解氧，然后将水样放入碘量瓶中，20℃密封培养5天，5天后再取出测定水中的溶解氧。

理论上BOD5不会为负值，因为水样中的有机物被消耗掉了，氧气也被消耗掉了。但如果培养过程中密封工作没有做好，五天后的溶解氧含量就可能会大于五天前，尤其是五天后的温度明显低于五天前的时候。